Номер Т. 9, № 4 (36) 2019

Оцінка генетичного ризику розвитку раку яєчника — мутації генів BRCA1 і BRCA2 в Андижанській області

Мамарасулова Д.З., Мамадалиева Я.С., Эргашева З.А., Азизов Ю.Д.

Резюме. Мета дослідження — оцінити частоту шести відомих мутацій в генах BRCA1 і BRCA2 у вибірках хворих на рак яєчника (208 пацієнтів). Матеріали — блоки гістологічних препаратів. Генотипування проведено методом полімеразної ланцюгової реакції в режимі реального часу з використанням набору «ОнкоГенетика BRCA» (розширена комплектація; ТОВ «НВО ДНК-Технологія», Росія). Робота тест-систем заснована на модифікованому методі «примикальних проб» (kissing probes). Полімеразну ланцюгову реакцію проводили з використанням детектуючого ампліфікатора ДТпрайм (ТОВ «НВО ДНК-Технологія»). Мутації в генах BRCA1 і BRCA2 були виявлені у 11,1% хворих на рак яєчника. Мутація 5382insC в 20-му екзоні гена BRCA1 становила 8,7% вибірки пацієнтів із раком яєчника. У близьких родичів — 2% (n=50). Висока частота мутацій у генах BRCA1 і BRCA2 хворих на рак яєчника підтверджує необхідність тотального генетичного скринінгу в цій групі. Аналіз на наявність мутацій у генах BRCA1 (4153delA, 5382insC, Cys61Gly, 2080delA, 3819del-GTAAA, 3875delGTCT і BRCA2 (6174delT) може бути рекомендований для включення в скринінгові програми з виявлення спадкових випадків раку яєчника. Генетичний скринінг дозволяє ідентифікувати більшість випадків спадкових форм у хворих на рак яєчника з подальшою індивідуалізацією лікування пацієнток і спрямувати зусилля на профілактику та ранню діагностику захворювань при виявленні мутацій в генах BRCA1 і BRCA2 у здорових жінок.

Резюме. Цель исследования — оценить частоту встречаемости шести известных мутаций в генах BRCA1 и BRCA2 в выборках больных раком яичника (208 пациентов). Материалы — блоки гистологических препаратов. Генотипирование проведено методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени с использованием набора «ОнкоГенетика BRCA» (расширенная комплектация; ООО «НПО ДНК-Технология», Россия). Работа тест-систем основана на модифицированном методе «примыкающих проб» (kissing probes). Полимеразную цепную реакцию проводили с использованием детектирующего амплификатора ДТпрайм (ООО «НПО ДНК-Технология»). Мутации в генах BRCA1 и BRCA2 были выявлены у 11,1% больных раком яичника. Мутация 5382insC в 20-м экзоне гена BRCA1 составила 8,7% выборки пациентов с раком яичника. У близких родственников — 2% (n=50). Высокая частота мутаций в генах BRCA1 и BRCA2 больных раком яичника подтверждает необходимость тотального генетического скрининга в этой группе. Анализ на наличие мутаций в генах BRCA1 (4153delA, 5382insC, Cys61Gly, 2080delA, 3819del-GTAAA, 3875delGTCT) и BRCA2 (6174delT) может быть рекомендован для включения в скрининговые программы по выявлению наследственных случаев рака яичника. Генетический скрининг позволяет идентифицировать большинство случаев наследственных форм у больных раком яичника с последующей индивидуализацией лечения пациенток и направить усилия на профилактику и раннюю диагностику заболеваний при выявлении мутаций в генах BRCA1 и BRCA2 у здоровых женщин.

Введение

К настоящему времени идентифицировано и охарактеризовано два гена, наследуемые мутации в которых приводят к возникновению семейных форм рака грудной железы и рака яичника, — BRCA1 и BRCA2 (от BReast CAncer — рак грудной железы) [1, 6]. У всех родственников в семье, имеющих один и тот же патологический вариант гена, повышается риск развития онкологического заболевания. Этот риск в течение жизни, по некоторым данным, приближается к 90% [4, 6]. Еще более важно, что риск развития заболевания в молодом возрасте у носителей мутаций приблизительно в 10 раз превышает общий риск в популяции. Часто в одной семье выявляют случаи и рака грудной же­лезы, и рака яичника [2, 7].

Выявление мутаций с последующей диспансеризацией пациентов позволяет предотвратить развитие заболевания у пациентов с мутациями и их родственников. Не следует думать, что все случаи рака обусловлены наследуемыми мутациями, а склонность к заболеванию всегда передается по наследству. Около 85% случаев рака грудной железы возникают спорадически, и только 15% имеют наследственный генез [3, 5, 8].

Объект и методы исследования

Анализ проводился в Научно-диагностическом центре «Immunogen Test» города Ташкента (Узбекистан) под руководством доктора медицинских наук Т.Р. Хегай.

Материалом исследования являлись архивные патоморфологические препараты 208 больных с верифицированным диагнозом рака яичника, полученные из удаленных в ходе операции опухолевых тканей пациенток.

Выделение ДНК производили посредством стандартного протокола. При помощи микротома были получены секции толщиной 20 мкм, которые депарафинизировали с помощью инкубации в 3 сменах ксилола по 500 мл при температуре 37 °С. Длительность инкубации в каждой смене ксилола составляла 20 мин. Частичную регидратацию тканей осуществляли инкубацией по 10 мин в 3 сменах этанола (96%, затем 80 и 70% — по 500 мкл) при комнатной температуре. После удаления этанола секции подсушивали на воздухе и помещали в 200 мкл лизирующего раствора (ЮтМ Трис-HCl, рН=8,3; 1 mM EDTA; 2% Тритон Х-100, протеиназы К — до 500 мкг/мл). Лизис проводили при 60 °С в течение 12–24 ч, после чего образцы инкубировали на протяжении 10 мин при 95 °С с целью полной инактивации протеиназы К. Полученный лизат десятикратно разводили бидистиллированной водой [4, 9].

Результаты и их обсуждение

При тестировании на наличие мутаций BRCA1 BRCA1_4153delA, BRCA1_5382insC, BRCA1_3819delGTAAA, BRCA1_300T>G(Cys61GLY), BRCA1_2080delA, BRCA1_185delA, BRCA1_3875delA, BRCA2_2080delA, 6174delT не выявлено статистически значимой ассоциации между группами больных и ближайшими родственниками, однако при суммарной корреляции всех мутаций отмечено статистически значимое различие между группами. Мутации в группе больных раком составили 11,1%, а в группе здоровых лиц — 2%, что явилось статистически значимым различием χ=3,92, р=0,048.

Таким образом, наличие мутации в любом из тестированных аллелей в любой комбинации выявлено в 24 (9,3%) из 258 случаев. В группе здоровых участников мутации выявлены в 2% случаев, а у больных раком яичника — в 11,1%. Это свидетельствует о том, что наличие мутации BRCA1/2 хотя имеет тенденцию к ассоциации с раком яичника, тем не менее не может быть чувствительным диагностическим маркером. Существует необходимость выявления других факторов, играющих значимую роль в онкогенезе наряду с вышеуказанными генетическими маркерами (табл. 1).

Таблица 1. Частота встречаемости мутаций в гене BRCA1/2 в группах больных раком яичника и здоровых родственников

Наличие мутации в гене BRCA1, BRCA2 Наличие мутаций Рак яичника Здоровые
  n % n %
BRCA1_185delAG нет 208 100 50 100
есть 0 0 0 0
BRCA1_4153delA нет 202 97,1 50 100
есть 6 2,9 0 0
BRCA1_5382insC нет 190 91,3 49 98
есть 18 8,7 1 2
BRCA1_3819delGTAAA нет 205 98,6 50 100
есть 3 1,4 0 0
BRCA1_3875delGTCT нет 208 100 50 100
есть 0 0 0 0
BRCA1_300T>G(Cys61GLY) нет 206 99 50 100
есть 2 1 0 0
BRCA1_2080delA нет 205 98,6 50 100
есть 3 1,4 0 0
BRCA2_6174delT нет 208 100 50 100
есть 0 0 0 0
BRCA нет 185 88,9 49 98,0
есть 23 11,1 1 2,0

Преобладала мутация 5382insC (BRCA1) — 4,0% выборки больных раком грудной железы, 11,6% выборки больных раком яичника, что согласуется с данными многочисленных работ отечественных и зарубежных авторов, в которых показано превалирование мутации 5382insC в гене BRCA1 в различных областях Андижанской области. У здоровых ближайших родственников повышенный риск развития рака яичника зафиксирован у 2%, что свидетельствует о высоком риске возникновения злокачественного новообразования.

Пять мутаций — 4153delA, 5382insC, Cys61Gly, 2080delA, 3819delGTAAA в гене BRCA1 — были зарегистрированы и у больных раком яичника, а у здоровых участников, подверженных риску развития рака, — мутация 5382delA.

Интерес также представляет наличие выявленных мутаций в различных гистологических группах. Среди больных со светлоклеточной гистологической опухолью частота мутаций отмечена у 10 (20,1%) в сосочковой форме опухоли, у 2 (17,5%) — в дисгерминоме, 13,3% — в эмбриональной опухоли, 12,5% — тератобластоме, и гранулезоклеточная опухоль составила 5,6 и 5,0% соответственно (табл. 2).

Таблица 2. Наличие мутаций в различных гистологических группах

Тип опухоли Нет мутаций Есть мутация
n % n %
Светлоклеточная 4 1 (0,7) 1 4,2
Сосочковая 47 20,1 10 41,7
Дисгерменома 13 5,6 2 8,3
Эмбриональная 7 3,0 1 4,2
Недифференцированная 23 9,8 3 12,5
Серозная 39 16,7 4 16,7
Тератобластома 17 7,3 1 4,2
Гранулезоклеточная 19 8,1 1 4,2

При рассмотрении данных по выживаемости больных раком яичника в группах с наличием или отсутствием BRCA1/2 анализ по Каплану — Мейеру не выявил статистически достоверной значимости. Интервал достоверности (95% доверительный интервал) в обеих группах широко варьировал, что, возможно, свидетельствует о влиянии других факторов.

Выводы

Диагностическую панель, включающую пять мутаций (4153delA, 5382insC, 3819delGTAAA, Cys61Gly, 2080delA в гене BRCA1), можно рекомендовать в качестве стандартной для первичного генетического скрининга пациентов, направленных на обследование в учреждения здравоохранения для выявления наследственной предрасположенности к раку яичника и подтверждению генетического диагноза наследственной формы злокачественного новообразования (рака яичника).

Генетический скрининг позволяет идентифицировать большинство случаев наследственных форм у больных раком яичника с последующей индивидуализацией лечения пациенток и направить усилия на профилактику и раннюю диагностику заболеваний при выявлении мутаций в генах BRCA1 и BRCA2 у здоровых женщин.

Список использованной литературы

1. Батенева Е.И., Мещеряков А.А., Любченко Л.Н. и др. (2011) Частота одиннадцати мутаций генов BRCA1 и BRCA2 в неотобранной выборке больных раком молочной железы россиянок. Уральский Медицинский журнал, 3 (81): 69–73.

2. Грудинина Н.А., Голубков В.И., Тихомирова О.С. и др. (2005) Преобладание широко распространенных мутаций в гене BRCA1 у больных семейными формами рака молочной железы Санкт-Петербурга. Генетика, 41(3): 405.

3. Давыдов М.И., Аксель Е.М. (2011) Статистика злокачественных новообразований в России и странах СНГ в 2009 году. Вестник РОНЦ им. Н.Н.Блохина РАМН, 22(3(85).

4. Кофиади И.А., Ребриков Д.В. (2006) Методы детекции однонуклеотидных полиморфизмов: аллель-специфичная ПЦР и гибридизация с олигонуклеотидной пробой. Генетика, 42(1): 22–32.

5. Любченко Л.Н. (2009) Наследственный рак молочной железы и/или яичников: ДНК-диагностика, индивидуальный прогноз, лечение и профилактика. Москва, РОНЦ им. Н.Н. Блохина, 2009.

6. Ferla R., Calò V., Cascio S. et al. (2007) Founder mutations in BRCA1 and BRCA2 genes. Ann. Oncol., 18 (suppl 6): 93–98.

7. Gayther S.A., Harrington P., Russell P. et al. (1997) Frequently occurring germ-line mutations of the BRCA1 gene in ovarian cancer families from Russia. Am. J. Hum. Genet., 60: 1239–1242.

8. Krylova N.Y., Lobeiko O.S., Sokolenko A.P. et al. (2006) BRCA1 4153del A founder mutation in Russian ovarian cancer patients. Hered. Cancer Clin. Pract., 4(4): 193–196.

9. Lalwani N., Prasad S.R., Vikram R. et al. (2011) Histologic, molecular, and cytogenetic features of ova­rian cancers: implications for diagnosis and treatment. Radiographics, 31(3): 625–646.

Коментарів немає » Додати свій
Leave a comment